基因組序列的迅速獲得推動(dòng)了一門新興學(xué)科——功能基因組學(xué)的發(fā)展，這一學(xué)科重點(diǎn)關(guān)注基因功能的變化。擴(kuò)增性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Amplified restriction fragment length polymorphism，AFLP）分析以及反向遺傳學(xué)都是功能基因組學(xué)的重要組成部分。

傳統(tǒng)的反向遺傳學(xué)，例如用轉(zhuǎn)座子（transposon）敲除特定基因，雖然可以準(zhǔn)確測(cè)定表型，但需要進(jìn)行耗時(shí)的轉(zhuǎn)基因或復(fù)雜的組織培養(yǎng)。而且由于這種基因敲除的方法將整個(gè)基因敲除，無(wú)法觀察到活性基因功能部分缺失的結(jié)果。

為克服此基因敲除方法的局限性，進(jìn)一步獲得關(guān)于活性基因突變的信息，F(xiàn)red Hutchinson癌癥研究中心的研究者們發(fā)明了一種定向誘導(dǎo)基因組局部突變（TILLING： Targeting Induced Local Lesions In Genomes）技術(shù)。該方法具有簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，它利用化學(xué)突變方法來(lái)獲得所有基因的傳統(tǒng)的點(diǎn)突變等位基因系列。對(duì)那些表型分析時(shí)會(huì)牽涉到亞致死等位基因的重要基因，TILLING的方法具有其*的優(yōu)勢(shì)。隨著TILLING方法有效應(yīng)用到越來(lái)越多的生物種類，如果蠅，擬南芥，斑馬魚，玉米等，它在遺傳學(xué)研究方面的重要價(jià)值也越發(fā)體現(xiàn)出來(lái)。

但由于點(diǎn)突變一般很難被檢測(cè)出來(lái)，一直是TILLING技術(shù)應(yīng)用上的一個(gè)障礙。要得到好的結(jié)果，要求檢測(cè)儀器不僅靈敏度高，還能夠識(shí)別假陽(yáng)性位點(diǎn)。我們?cè)谶@兒給大家引薦一種更簡(jiǎn)便，靈敏，準(zhǔn)確的高通量TILLING分析技術(shù)：雙色紅外熒光檢測(cè)技術(shù)。

雙色紅外熒光檢測(cè)技術(shù)是美國(guó)LI-COR公司的技術(shù)。LI-COR長(zhǎng)期致力于此項(xiàng)技術(shù)在生物學(xué)研究中的應(yīng)用，他們開(kāi)發(fā)的Odyssey雙色熒光掃描系統(tǒng)及DNA遺傳分析系統(tǒng)都取得了很大成功。由于雜質(zhì)、干擾分子在紅外區(qū)幾乎不發(fā)光，用紅外熒光進(jìn)行檢測(cè)的背景非常低，靈敏度很高，可檢測(cè)到低達(dá)1moles的熒光分子。加上雙通道檢測(cè)（680nm激發(fā)，710nm檢測(cè)；780nm激發(fā)，820nm檢測(cè)），兩個(gè)通道檢測(cè)波長(zhǎng)相距110nm，相對(duì)于通常的可見(jiàn)熒光四色檢測(cè)來(lái)說(shuō)，幾乎沒(méi)有光譜重疊的干擾（見(jiàn)下圖），保證了TILLING分析中每一個(gè)突變堿基的準(zhǔn)確識(shí)別及整個(gè)檢測(cè)的靈敏度。