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上海士鋒生物科技有限公司
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士鋒生物凝集反應(yīng)(agglutination reaction)實驗

時間:2014/1/8閱讀:905
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當(dāng)顆粒性抗原與其相應(yīng)抗血清混合時,在有一定濃度的電解質(zhì)環(huán)境中,抗原凝集成大小不等的凝集塊,叫做凝集反應(yīng)。 
凝集反應(yīng)廣泛地應(yīng)用于疾病的診斷和各種抗原性質(zhì)的分析。即可用已知免疫血清來檢查未知抗原,亦可用已知抗原檢測特異性抗體。 
一.直接凝集反應(yīng) 
顆粒抗原與抗體直接結(jié)合出現(xiàn)凝集現(xiàn)象叫直接凝集反應(yīng)。 
(一)玻片凝集反應(yīng) 
材料: 
1.診斷血清:1:10稀釋的傷寒桿菌診斷血清 
2.菌種:傷寒桿菌、痢疾桿菌24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物 
3.生理鹽水、載玻片、毛細(xì)吸管 
方法: 
1.取清潔玻片一張,用蠟筆劃為三格,并注明號碼。無菌操作下,用接種環(huán)于1、2格內(nèi)加1:10稀釋傷寒桿菌診斷血清1-2滴,第三格加1-2滴生理鹽水。 
2.無菌操作下,用接種環(huán)取傷寒桿菌培養(yǎng)物少許,混于第三格中,再混于*格中(不能先混*格再混第三格,因為這樣將使診斷血清混入鹽水而影響對照結(jié)果),將細(xì)菌與鹽水或血清混合均勻使呈乳狀液。此時取菌量不可過多,使懸液呈輕度乳濁即可。 
3.同法取枯草桿菌培養(yǎng)物少許,于第二格內(nèi)混勻。 
4.輕輕搖動玻片,經(jīng)1-2分鐘后肉眼觀察,出現(xiàn)乳白色凝集塊者,即為陽性反應(yīng);仍為平等的乳濁液者,即為陰性反應(yīng)。如結(jié)果不夠清晰,可將玻片放于低倍顯微鏡下觀察。 
(二)試管凝集反應(yīng) 
為一種定量試驗,用已知抗原檢查血清中有無特異抗體,并測定其相對含量。 
材料: 
1.診斷血清1:10稀釋傷寒桿菌“H”血清,1:10稀釋傷寒桿菌“O”血清。 
2.菌液:傷寒桿菌“H”菌液,傷寒桿菌“O” 菌液。 
3.生理鹽水,小試管,吸管。 
方法: 
1.取潔凈小試管14只分兩排排列于試管架上,每排7只依次用蠟筆注明號碼,于每管中分別加入0.5毫升生理鹽水。
2.在第1排1管中加入1:10稀釋傷寒H血清0.5毫升,于管內(nèi)連續(xù)吹吸3次,使血清與鹽水充分混合,而后吸出0.5毫升注入第2管,同樣予以混勻后吸出0.5毫升注入第3管。依次類推,稀釋到第6管,自第6管吸出0.5毫升棄去。此時,自第1管至第6管的血清稀釋倍數(shù)為1:20,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640。第7管不加血清作為對照。 
3.同法用吸管吸取1:10稀釋傷寒桿菌O血清加入第2排第1管,并依次如上法予以稀釋。 
4.用移液管吸取傷寒桿菌H菌液,加收第1排各管中每管0.5毫升(由鹽水對照管開始,依次由后向前加入)此時血清稀釋倍數(shù)又增加了一倍。 
5.同法于第2排各管中加入傷寒O菌液0.5毫升。 
6.將各管振蕩混勻,放37℃水浴箱中2—4小時或37℃孵育箱中過夜次日取出觀察
結(jié)果。 
觀察結(jié)果: 
1.觀察切勿搖動試管,以免凝集塊分散。 
2.先看對照管,此管應(yīng)無凝集現(xiàn)象,管內(nèi)液體仍成混濁狀態(tài)。但如放置時間較長,細(xì)菌堆于管底成小圓點狀,為陰性反應(yīng)。 
3.試驗管應(yīng)自第1管看起,如有凝集時則于管底有不同大小的圓片狀邊緣不整齊的凝集物,上清則澄清透明或不同程度混濁。凝集的強弱可用“+”號表示如下: 
“++++”凝集很強,管內(nèi)液體*澄清,凝集塊*沉于管底; 
“+++”凝集強,管內(nèi)液體不*澄清稍有輕度混濁,凝集塊沉于管‍底; 
“++”凝集中等強度,液體半澄清,凝集塊沉于管底; 
“+”凝集弱,管內(nèi)液體混濁,少量凝集塊沉于管底; 
“-”不凝集,管內(nèi)液體和對照管同樣混濁,無凝集塊。 
4.輕輕振蕩各管,觀察凝集塊的狀態(tài),對照管的細(xì)菌在振蕩時呈煙霧狀上升,隨即消散,細(xì)菌分散仍呈混濁狀態(tài)。“H”菌液的凝集塊疏松呈棉狀,大片沉于管底輕搖即升起,并極易破碎。“O”菌液凝集呈緊密顆粒狀,沉于管底堅實致密,輕輕振搖不易升起,凝集顆粒較小不易搖碎。 
5.記錄觀察的結(jié)果并制定凝集效價。通常以能產(chǎn)生明顯凝集(++)的血清大稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價。如血清的zui低稀釋度(即第1管1:40)仍無凝集應(yīng)報告為低于1:40。如血清的zui高稀釋度(即第6管1:1280)仍顯*凝集現(xiàn)象。,應(yīng)報該血清效價高于1:1280。

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