ADV核酸檢測實(shí)驗(yàn)

2023年10月29日 19:57通派（上海）生物科技有限公司點(diǎn)擊量：1247

ADV核酸檢測實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簷z測動物血清或血漿、肝、脾、淋巴結(jié)組織等樣本中(ADV)DNA，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

實(shí)驗(yàn)原理：選取一對(ADV)特異性引物和一條特異性熒光探針，應(yīng)用堿裂解法提取DNA，后者在耐熱DNA聚合酶(Taq酶)作用下，配以FQ-Buffer(內(nèi)含MgP2+P、Tris-HCl等)、四種核苷酸單體(dNTPs)等成分，通過PCR-熒光探針體外擴(kuò)增法對(ADV)進(jìn)行擴(kuò)增，從而達(dá)到快速實(shí)時(shí)定量檢測之目的。

適用標(biāo)本類型：疑似動物血清或血漿、肝、脾、淋巴結(jié)組織和咽拭子等樣本。

標(biāo)本采集：

血清：用無菌注射器抽取受檢動物靜脈血2毫升，注入無菌5ml干燥管(或含促凝劑)，立即輕輕顛倒管子混合5至10次，密閉送檢。

肝、脾、淋巴結(jié)等組織：取可疑部位組織1g，轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml的離心管中，密閉送檢。

保存和運(yùn)輸：標(biāo)本可立即用于測試， 2-8℃保存下不應(yīng)超過24小時(shí)； -70℃以下長期保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本運(yùn)送時(shí)應(yīng)采用0℃冰壺。

1.（標(biāo)本預(yù)處理）血清、血漿等液體標(biāo)本：吸取液體標(biāo)本100ul至新的潔凈的1.5ml離心管，加入100ul核酸提取液A，13,000rpm離心3min，去上清保留約50ul沉淀。

2.（標(biāo)本預(yù)處理）肝、脾、淋巴結(jié)等組織：用適量滅菌生理鹽水清洗送檢的組織的血液；取大約100mg的組織，加入1ml的滅菌生理鹽水用勻漿研磨成組織漿，移至新的1.5ml離心管，13,000rpm離心5min，去上清留沉淀；

DNA提?。合蛏鲜鰳?biāo)本中加入50μl核酸提取液B充分混勻，100℃烈解10min。13,000rpm 離心3min，備用。

陰性質(zhì)控品：取50ul陰性質(zhì)控品，加50ul核酸提取液B充分混勻(提取液用前需室溫溶解并充分混勻)后100℃10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，取上清液4ul做PCR反應(yīng)。

ADV陽性質(zhì)控品：直接取4ul進(jìn)行PCR擴(kuò)增，或按照PCR擴(kuò)增介紹方法進(jìn)行定量分析。

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